农杆菌介导淀粉分支酶基因RNAi片段转化玉米的研究

以玉米自交系“178”和“R18红”的胚性愈伤组织为材料,通过愈伤组织对潮霉素的敏感性实验,确定了潮霉素15 mg/L~25 mg/L为愈伤组织适宜的选择压。利用农杆菌(Agrobacterium tum efaciens)介导将淀粉分支酶基因RNA干涉表达载体转入玉米自交系中,并对农杆菌转化系统的条件进行研究。结果表明:在感染液和共培培养基中分别都加入100μm ol/L乙酰丁香酮和50 mg/L抗坏血酸,农杆菌LBA4404的菌液OD600为0.6、侵染时间20 m in为农杆菌转化的最适条件。对转化的愈伤组织分化诱导出苗后进行PCR检测,证明外源目的基因已整合到玉米基因组中,转化率最高达到2.4%。     

透明颤菌血红蛋白的DNA改组研究

为提高透明颤菌血红蛋白在限氧条件下促进宿主细胞生长的能力,首先通过易错PCR向透明颤菌血红蛋白基因中引入突变,再结合DNA改组对其进行改造。将改组基因置于透明颤菌血红蛋白天然启动子下游,转化大肠杆菌DH5α,构建改组文库。以限氧培养条件下菌体沉淀的颜色为指标进行试管初筛,再以限氧和极端限氧条件下菌体湿重为指标进行摇瓶复筛,最终得到一个高活性突变蛋白VHb'042506。该蛋白使宿主的菌体湿重在限氧和极端限氧条件下较原基因转化子分别提高了31.25%和58.75%。经测序和比对,该基因与原基因相比发生了11处碱基点突变,致氨基酸4处错义突变。CO差光谱实验显示该蛋白具有更强的特征吸收。     

适合棉铃虫细胞HzAm1生长的培养基筛选及低血清驯化

昆虫细胞-杆状病毒系统是昆虫杀虫剂生产和医用外源基因表达的有效工具。昆虫细胞的无血清或低血清培养是十分必要的。从三种商业化的培养基TC-100、GRACE和IPL-41中筛选出了最适合棉铃虫细胞HzAm1生长的基础培养基TC-100。以该培养基为基础,将血清用量从常用的10%降至1%,同时补加一定量的水解乳蛋白以及酵母提取物等,对棉铃虫细胞HzAm1进行驯化培养,效果良好。     

亚油酸产生菌诱变育种

采用紫外线复合氯化锂诱变一株产亚油酸真菌拟青霉 3#B ,选出高产株B3a10。其摇瓶发酵生物量达 10 0 75g L ,脂含量达 6 0 0 0 0 % ,油酸 1.876g L ,亚油酸 1.85 4g L ,γ 亚麻酸 6 9 0 0 0mg L ,二十二碳六烯酸32 0 0 0mg L。油酸、亚油酸、γ 亚麻酸、二十二碳六烯酸分别比出发菌株 3#B(95 8mg L)提高了 82 0 ,896 ,30 ,2mg L。     

烟草中一条新的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及表达分析

利用差异显示技术从烟草中分离到一个受乙烯利诱导表达的cDNA片段,结合RACE扩增技术获得该基因的全长序列。该全长cDNA共含1350个碱基,编码区有1170 bp,通过GenBank同源性比较发现它与一条已知的烟草S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS1,EC2．5．1．6)的基因编码区存在90％的同源性,编码的氨基酸顺序96％同源,而在cDNA的5’及3’非编码区同源性很低,且有一些短片段的缺失。设计合适的引物分别对这两个SAMS基因进行RT-PCR分析表明,SAMS1基因受高温诱导表达增强,但不受甲基紫晶诱导的氧化胁迫及盐胁迫影响,而新分离到的这个基因(SAMS2)的表达同时受高温、甲基紫晶及高盐3种胁迫的诱导。     

性畸变对腹足类生殖和种群的影响

具有内分泌干扰效应的三丁基锡能引起腹足类产生性畸变现象。在性畸变过程中 ,雌性个体会由于生殖孔口被前列腺取代或被输精管阻塞、贮精囊或卵囊腺开裂、卵囊腺内部被阻塞以及卵巢转化为精巢等多种原因而丧失生殖能力 ,甚至死亡。并由此引起雌、雄性比和幼、成年个体比的降低 ,导致种群衰退。有浮游幼体的种类可以通过外来种群的成功迁入使种群得以维持 ,而无浮游幼体的种类 ,由于幼体迁移能力差而最终导致种群的区域性灭绝。性畸变这种典型的功能效应对其他内分泌干扰物质的生态效应研究有启示作用。     

华北太行山前平原农田土壤养分的空间变异性研究

采用地统计方法,分别对栾城县(面积约30490hm^2)和中国科学院栾城生态农业试验站示范区(15hm^2)农田耕层土壤养分的空间变异特征进行了研究．结果表明,在2个不同采样间距下,各土壤养分含量均具有空间相关性,县域范围近似以1km网格采样,最大相关距离为4．2～15．6km,在示范区以20m网格采样,则为112～223m;在同一采样间距下,土壤有机质、全氮、全磷、速效养分(N、P、K)含量的空间变异结构也各不相同,具有块金方差效应,半方差图分别遵从高斯和球函数模型．认识本区土壤的这种空间变异结构有助于实现对农田土壤养分的分区和合理管理．     

蛋白激酶C在双歧杆菌预防大肠癌生长中的作用

目的:从信号分子蛋白激酶C(PKC)这一角度探索青春型双歧杆菌预防大肠癌生长的途径.方法:建立大肠癌裸鼠移植瘤模型,用激光共聚焦显微镜测定大肠癌组织PKC α、βⅠ、βⅡ、γ、ε和ζ的含量.结果:荷瘤鼠经双歧杆菌预先处理后,其大肠癌组织PKC α和βⅡ的平均荧光强度明显低于肿瘤对照组(P＜0.01),而PKC βⅠ、γ、ε和ζ的平均荧光强度在两组间差异无显著性(P＞0.05).结论:青春型双歧杆菌体内可通过降低PKCα、βⅡ的活性来预防大肠癌的生长.     

肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7紧密粘附素免疫保护性片段(Intimin-C)的克隆表达纯化及部分生物学活性研究

克隆表达并纯化肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O15 7∶H7紧密粘附素免疫保护性片段 (Intimin C) ,并对其部分生物学活性进行研究。设计引物采用PCR自O15 7菌基因组扩增紧密粘附素免疫保护性片段 (Intimin C)的编码基因eae C ,T A克隆测序后构建原核表达质粒 pET 2 8a(+) eaeC并转化E .coliBL2 1(DE3) ,诱导表达破菌及包涵体洗涤后采用离子交换柱和亲和层析柱对目的蛋白进行纯化 ,PAGE电泳初测目的蛋白的分子量、滴定法初测目的蛋白的等电点 ,并以纯化蛋白Intimin C免疫家兔制备多抗血清。采用PCR法自O15 7菌基因组扩增出了约 90 0b…     

卵形异绒螨对梨二叉蚜的控制作用

卵形异绒螨(Allothrombium ovatum)是蚜虫的重要天敌,其对果树蚜虫的控制效果,之前尚无报道.经笔者多年在徐州市果树站试验基地的研究发现,在长期利用绒螨及其它无公害措施进行病虫害防治的生防园,早期蚜虫不需要进行化学防治,利用生防措施就能控制其危害,而常规对照园期间需喷两次药.2003年的试验表明,在生防园用5%溴氰菊酯1500倍防治梨二叉蚜(Schizaphis piricola Matsumura),虽然药后1天防效达95.1%,但20天后只有71.7%,这时生防园地控制效果达96.7%.经几年的试验表明,化防容易引起蚜虫产生抗性,费时费工,增加了成本,果面残留农药多,对环境污染严重,且树上种群数量的消长变化猛增猛减,极不稳定.而生防园的害虫种群数处于低水平之下,不会对果树造成伤害.同时,利用自然天敌控制害虫,成本低,不污染环境,无副作用.